Internat Pharma

01 · Pourquoi ce chapitre

Électrophorèse des protéines sériques, typage des hémoglobines, transferrine de l'alcoolisme chronique : l'électrophorèse sépare des solutés chargés sous un champ électrique. Un principe simple, des applications cliniques quotidiennes.

02 · Principe

Sous un champ électrique $E$ , un soluté chargé se déplace à la vitesse $v = \mu,E$ , où $\mu$ est la mobilité électrophorétique. Elle dépend de la charge du soluté (donc du pH), de la viscosité du solvant et du rayon de Stokes (corrélé à la masse).

03 · Point isoélectrique

Pour les protéines et acides aminés (groupements ionisables), la charge globale change avec le pH.

04 · Électrophorèse sur gel

Conditions natives : acétate de cellulose, agarose, PAGE — séparation selon charge et taille.
Conditions dénaturantes SDS-PAGE : le détergent SDS confère une charge négative proportionnelle à la masse ; la séparation se fait alors selon la masse seule (masse élevée = plus freinée).
Focalisation isoélectrique (IEF) : gradient de pH ; chaque protéine s'immobilise là où $pH = pI$ .
Électrophorèse bidimensionnelle : IEF (pI) puis SDS-PAGE (masse).

05 · Électrophorèse capillaire

Dans un capillaire de silice sous 10 à 30 kV : très haute efficacité ( $10^5 < N < 10^6$ plateaux), analyse rapide, volumes de l'ordre du nanolitre. Un flux électroosmotique (silanolates ionisés en surface) entraîne l'ensemble des solutés vers la cathode. Détection : UV, fluorescence, ampérométrie, SM.

06 · Applications

07 · À retenir

$v = \mu,E$ ; mobilité selon charge, viscosité, rayon de Stokes.
$pI$ : charge nulle, pas de migration ; base de l'IEF.
SDS-PAGE = séparation par la masse (charge uniformisée).
Capillaire = très haute efficacité, flux électroosmotique.

QCM · épreuve 1

QCM

Q1. La SDS-PAGE sépare les protéines selon…

Q2. Au point isoélectrique (pI) d'une protéine…

Q3. En focalisation isoélectrique (IEF), la migration s'arrête quand…

Annales du concours sur ce thème

6 questions tombées au concours, portant sur ce chapitre. Voir toutes les annales →

QCM n°51 Décembre 2020

Parmi les propositions suivantes concernant les méthodes électrophorétiques, quelles sont celles qui sont exactes ?

ALa méthode d'électrophorèse capillaire correspond à la migration des analytes dans un tube en silice de faible diamètre
BLa migration électrophorétique est indépendante de la température
CEn électrophorèse de zone classique, la séparation des espèces neutres est possible
DLa séparation a lieu sous l'effet d'un champ électrique
ELe mode micellaire permet de séparer les espèces neutres

QCM n°51 Décembre 2019

Parmi les propositions suivantes concernant l'électrophorèse, quelles sont celles qui sont exactes ?

ALa séparation électrophorétique est influencée par la température
BL'électrophorèse capillaire permet de séparer un anion et une espèce neutre
CLa séparation électrophorétique d'acides faibles est indépendante du pH
DLe catharomètre est un détecteur utilisé en électrophorèse capillaire
EL'électrophorèse de zone permet de séparer des classes de protéines

QCM n°56 Décembre 2019

Parmi les propositions suivantes concernant le courant d'électro-endosmose au cours de l'électrophorèse capillaire en silice, quelles sont celles qui sont exactes ?

AIl est toujours d'intensité inférieure au courant électrophorétique
BIl peut permettre la migration des espèces négatives vers la cathode
CIl varie avec le pH
DIl est systématiquement de sens contraire au courant électrophorétique
E1l peut permettre le déplacement d'une espèce neutre

QCM n°14 Décembre 2016

Parmi les protéines suivantes, quelle(s) est (sont) celle(s) qui migre(nt) au niveau des bétaglobulines lors de l'électrophorèse des protéines sur agarose à pH = 8,6 ?

AL'albumine
BLa transferrine
CL'haptoglobine
DLa fraction C3 du complément
ELes immunoglobulines M

QCM n°42 Décembre 2015

Parmi les propositions suivantes sur l'électrophorèse capillaire, lesquelles sont exactes ? Les séparations par électrophorèse capillaire

ASont réalisées sur un support en acétate de cellulose
BPermettent l'analyse des anions
CSont réalisées dans des capillaires en silice fondue
DPermettent l'analyse des substances neutres
EExploitent le flux d'électro-endosmose

QCM n°8 Décembre 2014

Parmi les propositions suivantes, laquelle est inexacte ? Les techniques électrophorétiques utilisent l'action du courant électrique. Il y a génération de chaleur par effet Joule qui crée :

AUne homogénéisation du milieu
BDes différences de densité dans le milieu
CDes courants convectifs
DUn mouvement d'eau par évaporation
EUne variation de la conductivité